医用清洗剂卫生要求 - 酶活力的试验方法(脂肪酶)

T/WSJD 002-2019 医用清洗剂卫生要求

范围
本标准规定了医用清洗剂原料要求、基本要求、技术要求、检验方法、运输、贮存和包装、标识要求及注意事项。
本标准适用于医用清洗剂的生产与应用。

术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
医用清洗剂  medical detergent
用于增强水对医疗器械、器具及其他相关物品上污物清洗效果的制剂。
酸性医用清洗剂  acid medical detergent
pH值≤6.5的医用清洗剂。
中性医用清洗剂  neutral medical detergent
pH值在6.5～7.5之间的医用清洗剂。
碱性医用清洗剂  alkaline medical detergent
pH值≥7.5的医用清洗剂。
含酶医用清洗剂  enzyme-containing medical detergent
加入了酶制剂如蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶等，能分解相应有机污染物的医用清洗剂。
特殊用途的医用清洗剂  detergent for special use
具有专门用途，如抗抑菌、去除生物膜、除垢除锈等作用的医用清洗剂。

原料要求
表面活性剂：应为无毒或低毒级物质。
酶：其质量应符合企业标准要求。
抗菌剂：不得使用抗菌药物及其同名原料，不得使用各种醛类化合物。
水：在25°C条件下，电导率≤15μS/cm。

基本要求
医用清洗剂应使用安全，可有效去除相应的污染物。
医用清洗剂应符合下列要求：
a) 与人体组织有良好的相容性，对人体无毒、无刺激；
b) 与医疗器械及其材料有较好的材料相容性，不与医疗器械发生反应或产生有毒、有害的产物；
c) 应没有或仅有轻微的金属腐蚀性，不影响医疗器械的机械性能，不影响消毒灭菌因子的穿透；
d) 医用清洗剂及其降解产物应不会造成环境污染。

技术要求
感官
液体产品应清澈透明，不分层，无悬浮物或沉淀，无异味，颜色宜为浅色；固体产品应外形规则，色泽均匀，无明显杂质和污迹。
杂质
荧光增白剂、甲醇、甲醛、砷(1%溶液中以砷计)、重金属(1%溶液中以铅计)的要求按 GB 9985。
金属腐蚀性
中性医用清洗剂对金属基本无腐蚀；酸性和碱性医用清洗剂宜对金属基本无腐蚀或仅有轻度腐蚀；医用清洗剂对器械的腐蚀程度不宜强于水洗。
硬度
医用清洗剂宜能减少或络合水中的金属离子(如Ca²⁺ 和Mg²⁺)，降低水的硬度，减少水垢沉积。
发泡
医用清洗剂宜为低泡型，易于漂洗干净。
稳定性
物理性状稳定性
在高温、低温试验条件下，产品的物理性状应保持原有状态不变。
有效成分含量稳定性
有效期应≥1年。
在有效期内，有效成分含量下降率应≤10%；有效成分无法测定的，其清洗效果应达到要求。
含酶医用清洗剂，在有效期内，酶活力下降率应≤20%。
开封后有效期
产品应注明开封后有效期。在标识的开封后有效期内，有效成分含量下降率应≤10%或其清洗效果达到要求。
清洗效果要求
医用清洗剂应符合下列实验结果：
a) 血液和细菌混合污染物试验：对细菌的去除率应≥99%，且ATP含量下降率应≥99%。
b) 人工模拟污染物试验：清洗后，肉眼观察污染物应溶解脱落，外观表面清洁光亮、无残留物质，且污染物去除率≥95%。
标明对蛋白有效的或标明含有蛋白酶的医用清洗剂，对蛋白的去除率应≥90%；标明对淀粉有效的或标明含有淀粉酶的医用清洗剂，对淀粉的去除率应≥60%；标明对脂肪有效的或标明含有脂肪酶的医用清洗剂，对脂肪的去除率应≥50%。
标明对生物膜有效的医用清洗剂，模拟生物膜中的细菌减少值在90%以上，ATP含量减少值在90%以上。
有抗菌作用的医用清洗剂，应说明抗菌作用的原理。在说明书规定的浸泡时间内，医用清洗剂应用液对铜绿假单胞菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的杀灭率≥90%。
安全性
医用清洗剂应达到实际无毒级。
医用清洗剂应为对皮肤无刺激或轻度刺激，不引起皮肤反应。
医用清洗剂表面活性剂生物降解度应≥90%。
微生物指标
细菌菌落总数限值为100CFU/mL，不得含有致病菌。

检验方法
酶活力测试：方法见附录B。

附录B (规范性附录)
酶活力的试验方法

B.4 脂肪酶
B.4.1 定义
1mL液体酶于40°C，pH=7.5的条件下，水解脂肪每分钟产生1μ mol的脂肪酸，即为一个脂肪酶国际单位，以U/g表示。
B.4.2 原理
脂肪酶在一定条件下，能使甘油三酯水解成脂肪酸、甘油二酯、甘油单酸和甘油，所释放的脂肪酸，可用标准碱溶液进行中和滴定，用pH计或酚酞指示液指示反应终点，根据消耗的碱量，计算其酶活力。 反应式为: RCOOH + NaOH ——→ RCOONa + H2O
B.4.3 试验材料
B.4.3.1 聚乙烯醇(PVA)聚合度1750±50。
B.4.3.2 橄榄油。
B.4.3.3 95%(体积分数)乙醇(GB/T 679)。
B.4.3.4 底物溶液的制备：
a) 称取聚乙烯醇(PVA)40g，加水800mL，在沸水浴中加热、搅拌，直至全部溶解，冷却后定容至 1000mL。以干净的双层纱布过滤，取滤液备用；
b) 量取4%PVA溶液150mL，加橄榄油50mL，用高速组织捣碎机处理6min (分2次处理，每次3min,中间休息5min)，即成乳白色PVA乳化液。该溶液要现用现配。该溶液如贮存在冰箱中，有效期为一周。
B.4.3.5 0.025mol/L磷酸缓冲液(pH=7.5)：
a) 甲液 称取磷酸二氢钾(KH2PO4)17.01g ，加蒸馏水溶解并定容至500mL；
b) 乙液 称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)44.77g，加蒸馏水溶解并定容至500mL；
c) 使用液 吸取甲液13mL，加乙液100mL，混匀，即成0.25mol/L磷酸缓冲液。使用时用蒸馏水稀释10倍，即成0.025mol/L磷酸缓冲液，用pH计校正。
B.4.3.6 氢氧化钠标准溶液c(NaOH)=0.05mol/L：按 GB/T 601 配制与标定c(NaOH)=0.5mol/L氢氧化钠标准溶液。使用时，准确稀释10倍。
B.4.3.7 10g/L酚酸指示液：按 GB/T 603 配制。
B.4.4 仪器设备
B.4.4.1 恒温水浴：40°C±0.2°C。
B.4.4.2 高速组织捣碎机：8000r/min～12000r/min。
B.4.4.3 pH计：分度值为0.02pH单位或2mV。
B.4.4.4 电磁搅拌器。
B.4.4.5 微量滴定：10mL，分刻度≤0.05mL。
B.4.5 试验步骤
B.4.5.1 待测酶液的制备
吸取液体酶1.00mL，用磷酸缓冲液定容至刻度摇匀、稀释倍数参考表B.3，控制酶液浓度，样品与对照消耗碱量之差在1mL～2mL范围内。注意，吸取样品时，应将酶液摇匀后再取。

B.4.5.2 测定
B.4.5.2.1 电位滴定法(方法一)
B.4.5.2.1.1 用pH=9.22的硼酸钠(硼砂)缓冲液，按pH计使用说明书进行校正仪器。
B.4.5.2.1.2 取两个100mL烧杯，于第一个空白杯(A)和第二个样品杯(B)中各加底物溶液(B.4.3.4)4.00mL和磷酸缓冲液(B.4.3.5)5.00mL，再于A杯中加入95%乙醇(B.4.3.3)15.0mL，于40°C±0.2°C水浴中预热5min，然后于A、B两杯中，各加待侧酶液1.00mL，立即混匀计时，在40°C±0.2°C水浴中准确反应15min，于B杯中立即补加95%乙醇15.0mL终止反应，取出。
B.4.5.2.1.3 在烧杯中放一枚转子，置于电磁搅拌器上，在搅拌下，用0.05mol/L 氢氧化钠标准溶液滴定，直至pH=10.3，为其终点，记录消耗0.05mol/L氢氧化钠标准溶液的体积。
B.4.5.2.2 指示剂滴定法(方法二)
B.4.5.2.2.1 取两个100mL锥形瓶，分别于空白瓶(A)和样品瓶(B)中，各加底物溶液(B.4.3.4)4.00mL和磷酸缓冲液(B.4.3.5)5.00mL，再于A瓶中加入95%乙醇(B.4.3.3)15.0mL，于40°C±0.2°C水浴预热5min，然后，在两瓶中各加待测酶液1.00mL，立即混匀计时，在40°C±0.2°C水浴中准确反应15min，在B瓶中立即补加95%乙醇15.0mL终止反应，取出。
B.4.5.2.2.2 于空白和样品溶液中各加酚酞指示液2滴，用0.05mol/L氢氧化钠标准溶液滴定，直至微红色并保持30s不褪为其终点，记录消耗0.05mol/L氢氧化钠标准溶液的体积。
B.4.6 结果计算
样品酶活力计算见式(B.5)：

式中：
X —— 样品的酶活力，单位为酶活力单位每克(u/g)；
B —— 滴定样品时消耗氢氧化钠标准溶液的体积，单位为毫升(mL)；
A —— 滴定空白时消耗氢氧化钠标准溶液的体积，单位为毫升(mL)；
c —— 氢氧化钠标准溶液浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；
0.05 —— 氢氧化钠标准溶液浓度换算系数；
50 —— 0.05mol/L氢氧化钠溶液1.00mL相当于脂肪酸50微摩尔(μ mol)；
1/15 —— 反应时间15min，以1min计；
n —— 稀释倍数；
所得的结果表示至整数。
B.4.7 结果的允许差
平行试验相对误差不得超过2%。


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