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洗涤用酶制剂 第2部分: 脂肪酶 - 酶活力的测定(自动滴定仪)

更新日期:2023-08-14   浏览量:402


GB/T 42239.2-2022 洗涤用酶制剂 第2部分: 脂肪酶

范围
本文件规定了洗涤用脂肪酶的产品分类、要求、试验方法、检验规则,以及标志、包装、运输、贮存和保质期。
本文件适用于经微生物发酵、提纯等工艺制得的用于洗涤剂工业的脂肪酶。

术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
脂肪酶  lipase
可将甘油三酯(油脂)水解,在不同阶段可释放出脂肪酸、甘油二酯、甘油单酯及甘油,同时也能催化酯合成和酯交换反应的酶。
脂肪酶酶活力  lipase activity
脂肪酶催化脂肪水解的能力。
注: 脂肪酶酶活力以脂肪酶酶活力单位表示,1g固体酶粉(或1mL液体酶),在一定温度和pH条件下,1min内水解底物产生1μmol的可滴定脂肪酸,即为1个酶活力单位,用U/g表示。

符号和缩略语
下列符号和缩略语适用于本文件。
JB-04: 胡萝卜素猪油污布。
F1: 洗前白度值。
F2: 洗后白度值。
R: 去污值。
P: 去污比值。

产品分类
按产品形态分为液体剂型和固体剂型。

要求
外观和理化性能要求
产品的外观和理化性能指标应符合表1的规定。
表1.jpg

定量包装要求
每批产品的销售包装净含量应符合 JJF 1070 的要求。

试验方法
酶活力
按附录A进行。
采用不同于附录A的方法测定时,应提供所应用的酶活力单位与本文件确定的酶活力单位的转换系数。

附录A  (规范性)
酶活力的测定
A.1 方法概要
脂肪酶在一定条件下,能使甘油三酯水解成脂肪酸、甘油二酯、甘油单酯和甘油,所释放的脂肪酸可用标准碱溶液进行中和滴定,用酚酞指示剂或自动滴定仪指示反应终点,根据消耗的碱量,计算其酶活力。反应式为:
RCOOH+NaOH→RCOONa+H2O
注1: 洗涤剂的存在会严重影响本方法。依不同洗涤剂的类型和浓度不同,这种影响表现为从抑制到激活。
注2: 酶会附着在塑料上,因此实验中用玻璃器具,避免使用塑料材质器具(移液枪头除外)。

A.2 试剂
A.2.1 聚乙烯醇(PVA),聚合度1750±50[不同来源或批号的PVA对实验结果有影响,结果报告应标明聚乙烯醇(PVA)厂家及生产批号]。
A.2.2 橄榄油(不同来源或批号的橄榄油对实验结果有影响,结果报告应标明橄榄油厂家及生产批号)。
A.2.3 95%乙醇。
A.2.4 磷酸二氢钾(KH2PO4)。
A.2.5 十二水磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)。
A.2.6 氢氧化钠。
A.2.7 盐酸。
A.2.8 酚酞。

A.3 仪器
A.3.1 恒温水浴: 精度为±0.2°C。
A.3.2 高速匀浆机。
A.3.3 pH计: 精度为0.01pH单位。
A.3.4 自动电位滴定仪。
A.3.5 自动移液器。
A.3.6 电磁加热搅拌器。
A.3.7 电磁搅拌器。
A.3.8 微量滴定管: 10mL,分刻度≤0.05mL。
A.3.9 分析天平: 精度为0.0001g。

A.4 溶液
A.4.1 2%PVA溶液
称取聚乙烯醇(PVA)10g(精确至0.1g)到500mL烧杯中,加水400mL,放入合适的转子,在电磁加热搅拌器上边加热边搅拌,搅拌速度以能把所有的PVA搅拌起来为宜,在微沸状态下加热搅拌约1h,直至全部溶解,在搅拌状态下逐渐冷却至室温,定容到500mL,该溶液室温下有效期为2d,密封保存。
注: 不能使用如冰块等快速冷却方式。
A.4.2 橄榄油底物溶液
称取2%PVA溶液150g,加橄榄油50g,用高速匀浆机在7000r/min(当乳化效果不好时可加大转速)下处理3min,即成乳白色PVA乳化液,放入转子,在电磁搅拌器上搅拌约20min,密封保存,该溶液室温下有效期为2d。若底物溶液在保存期内出现底部分层现象,应重新配制,若重新配制依然有底部分层现象或者在水浴中反应时有明显沉淀产生,更换其他来源的聚乙烯醇(PVA)。
注: 每次使用前需要搅拌并在搅拌的状态下移取该溶液,每次使用完毕及时密封保存。
A.4.3 盐酸溶液(1mol/L)
A.4.4 氢氧化钠溶液(0.5mol/L)
A.4.5 磷酸缓冲液(pH为7.5)
称取磷酸二氢钾(KH2PO4)19.6g,十二水磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)396.2g,加水约4.5L,搅拌至溶解均匀,用0.5mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调整pH至7.50±0.05,定容到5L。
A.4.6 氢氧化钠标准溶液(0.05mol/L)
按 QB/T 2739 配制与标定0.5mol/L的氢氧化钠标准溶液。使用时,准确稀释10倍。
A.4.7 酚酞指示液(10g/L)

A.5 样品溶液的制备
称取约1g样品(称准至0.001g),用磷酸缓冲液溶解并稀释。样品称量定容后放入转子,在电磁搅拌器上搅拌15min。
稀释时控制酶液浓度,推荐稀释倍数参考表A.1,例如,当样品酶活力约为100000U/g时,称量约1g样品到100mL容量瓶中,再稀释200倍。样品与空白消耗碱量之差在1.4mL~1.6mL范围内,若最终滴定结果超出该范围,重新稀释直至该范围内。
表1续.jpg

A.6 试验步骤
A.6.1 程序
按照表A.2所列程序分别进行空白和样品试验,选择自动电位滴定法或酚酞指示剂滴定法进行滴定。
表2.jpg

A.6.2 滴定
A.6.2.1 自动电位滴定法
对自动电位滴定仪进行仪器校正,用0.05mol/L的NaOH标准溶液即刻滴定,以突跃为滴定终点,最终溶液pH在30s内保持不变,记录消耗0.05mol/L的NaOH标准溶液的体积。
A.6.2.2 酚酞指示剂滴定法
加酚酞指示剂两滴,用0.05mol/L的NaOH标准溶液即刻滴定,滴定至微红色并保持在30s内不退色为滴定终点,记录消耗0.05mol/L的NaOH标准溶液的体积。

A.7 结果计算
产品的酶活力X以U/g表示,按公式(A.1)计算:
式1.jpg
式中:
X ——产品的酶活力,单位为酶活力单位(U/g);
V1 ——滴定样品时消耗0.05mol/L氢氧化钠标准溶液的体积,单位为毫升(mL);
V2 ——滴定空白时消耗0.05mol/L氢氧化钠标准溶液的体积,单位为毫升(mL);
c ——氢氧化钠标准溶液浓度,单位为摩尔每升(mol/L);
0.05——氢氧化钠标准溶液浓度换算系数;
n ——试样的稀释倍数;
50——0.05mol/L氢氧化钠溶液1.00mL相当于脂肪酸50μmol
m ——试样的质量,单位为克(g);
1/15——反应时间15min,以1min计。
结果按修约值表示,当结果大于或等于105,后三位取整;当结果大于或等于104且小于105,后两位取整;当结果大于或等于103且小于104,后一位取整。

A.8 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的10%,以大于10%的情况不超过5%为前提。


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